第一部分芩丹胶囊逆转自发性高血压大鼠心肌肥厚的实验研究

1.1研究背景

过氧化物酶增殖物激活受体是一类配体激活的核转录因子超家族成员，近年来的研究证实，在逆转高血压心室肥厚的过程中起着关键的作用，在配体的激动下，能抑制相关肥厚基因的表达，对高血压心室肥厚引起的心力衰竭起着预防和治疗的作用。的激活在心肌肥厚的发展过程中至关重要，近年来研究表明可能是抑制心肌肥厚的重要作用靶点。可以直接与发生蛋白质蛋白质之间的相互作用，形成转录抑制复合物，同时降低与结合活性，抑制合成，起到抑制其表达的作用。

苍丹胶囊是导师根据多年临床经验研制成的治疗高血压病肝热血瘀证的中药复方制剂，前期研究表明其在改善高血压血管重构中起着重要的作用，本研究通过研究荨丹胶囊对自发性高血压大鼠心肌组织的病理学及超微结构的影响，应用免疫组织化学法检测和的蛋白表达的改变，以及荧光实时定量检测对下游肥厚基因、的表达的影响，探讨芩丹胶囊对改善高血压心室肥厚的作用机制，为芩丹胶囊治疗高血压心室肥厚的临床应用提供有效的实验依据。

1.2目的

观察芩丹胶囊对大鼠心肌形态学及超微结构的改变及对大鼠血压的影响，探讨芩丹胶囊抑制大鼠心肌肥厚的疗效。观察芩丹胶囊在抑制大鼠心肌肥厚对和的蛋白表达以及对下游肥厚基因、的表达的影响，探讨芩丹胶囊抑制大鼠心肌肥厚的信号调控机制。

研究对象周龄雄性大鼠只和周龄大鼠只。随机分为组，每组只：对照组；对照组；替米沙坦组芩丹胶囊大剂量组芩丹胶囊小剂量组。组给予组给予芩丹胶囊组给予芩丹胶囊对照组和对照组分别给予等量蒸馏水。各组大鼠均分别灌胃给药，每日次，连续给药周。末次给药后禁食，不禁水。戊巴比妥钠腹腔注射，麻醉后进行后续实验。

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第二部分槲皮素激活对自发性高血压大鼠心肌肥厚信号转导通路的影响

2.1前言

是核内受体超家族成员之一，属于配体激活型转录因子。近年来有研究表明，在大鼠心肌组织和人类心脏组织中均有表达年，等发现在特异性的配体的激动下，能有效的抑制诱导的乳鼠心肌细胞肥大和敲基因小鼠中压力超负荷导致的心肌肥厚的现象，包括下调基因和骨豁肌的表达，充分提示在抑制心肌肥厚的发展起着关键性的作用。另外，相关研究显示大鼠肥厚心肌中蛋白质和表达水平均显著降低，从而反证了心肌细胞表达受抑制可能参与了高血压心室肥厚的发生机制。

2.2材料与方法

清洁级周龄雄性大鼠，体量，周龄雄性大鼠只，质量均购自于上海斯莱克实验动物技术有限公司。兔单克隆抗抗体：美国公司生产。兔单克隆抗，抗体：美国公司生产。辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠晶美生物技术有限公司生产。蛋白北京天根生化公司生产。蛋白浓度测定试剂盒：上海碧云天生物技术有限公司。预染蛋白质北京天根生化公司生产。硝酸纤维素膜孔径：美国公司生产。一抗稀释液：上海碧云天生物技术有限公司生产。脱脂奶粉：内蒙古伊利实业集团公司生产。放射自显影胶片：美国公司生产。辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗：晶美生物技术有限公司生产。每组只：⑴对、里啤对照组；槲皮素高剂量组，溶于的二甲基纤维素，槲皮素低剂量组，溶于的二甲基纤维素，对照组和对照组大鼠分别给予等量蒸馆水。各组大鼠均每日进行次灌胃给药，连续给药周。末次给药后，禁食，不禁水。腹腔注射戊巴比妥钠，麻醉后进行后续相关实验。

第二部分槲皮素激活对自发性高血压大鼠心肌肥厚信号转导通路的影响............46

2.1前言.............59

2.2材料与方法.............61

第三部分槲皮素对血管紧张素诱导的肥厚心肌细胞信号转导通路的影响...........87

3.1前言...............96

3.2材料与方法...........98

结论..........110

第三部分槲皮素对血管紧张素诱导的心肌细胞肥厚信号转导通路的影响

3.1前言

许多研究表明，黄酮类在大鼠巨噬细胞诱导的抑制环氧酶和一氧化氮合酶的过程中激活过氧化物酶体增殖物表达。也同时发现槲皮素可能通过多个靴点来改善高血糖，包括作为部分受体激动剂的作用。槲皮素是荨丹胶囊中桑寄生的有效成分，前期的动物实验研究表明，槲皮素可以显著改善自发性髙血压大鼠，的心室肥厚。本实验旨在通过技术进一步探讨槲皮素抑制心肌肥厚的相关途径，通过槲皮素抑制诱导的心肌肥厚生物活性，为其下一步的实验研究提供有效的依据。

3.2材料与方法

将液氮罐中的冻存管取出，检查盖子是否紧密。将液氮耀取出的冷冻管后，迅速转入水浴槽中。快速解冻后，轻摇冷冻管，使其在内全部融化。用含酒精消毒冷冻管后，移入无菌操作台内进行操作。将细胞悬液全部转入含有正常培养基液的离心管，反复轻轻吹打、离心、弃上清，用含有的少量培养液重悬并吹打细胞。倒置显微镜检测细胞活力和密度后，用培养液稀释至适宜浓度后，接种于培养瓶中，饱和湿度培养箱中培养。细胞处理完毕后，通过数码相机摄影后扫描，进行心肌细胞表面积的测定。以下分析结果，每种处理组随机选择个细胞的表面积。

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结论

心肌细胞的肥大主要是指心肌细胞体积的增大、肌节数量的增多和收缩蛋白类型的改变。肾素血管紧张素系统，在心肌肥厚的发生中起着重要作用，是起主要作用的生物活性物质，在诱导的心肌肥厚的过程中常伴有蛋白质的合成增加和细胞生长。同时还存在于血管、心、肾等局部组织。局部的存在并不依赖于循环系统中的它通过自分泌、胞内分泌和旁分泌的方式直接作用细胞和组织调节局部组织的生理功能，对维持心血管系统功能稳定起着重要的作用；与心脏周围组织的受体相互作用后，对心脏的重构产生剌激作用。总之，作为一个重要的神经内分泌因子，不仅能够调控心血管系统的生理功能，而且对心肌肥厚的病理生理过程也起到重要的作用。槲皮素能够有效的抑制心肌细胞的蛋白合成速率和细胞的表面积，从而达到抑制心肌细胞的肥厚的作用。槲皮素激活途径抑制诱导的心肌细胞肥厚转录因子，以及下游肥厚基因、蛋白和基因的高表达。

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参考文献（略）